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          紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的校正方法

          紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的校正方法

          • 對(duì)于雙光束分光光度計(jì)而言在使用前必須要做基線(xiàn)校正(也稱(chēng)為基線(xiàn)記憶),對(duì)于此項(xiàng)工作的原理和操作方法許多使用者的認(rèn)識(shí)不盡相同;為此談?wù)勎覀兊恼J(rèn)識(shí)。


            (一)為何要做基線(xiàn)校正?

            光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)基本是由光源(氘燈、鎢燈)、單色器(光柵、狹縫)、檢測(cè)器(光敏二極管、光電倍增管)等三部分組成的。在我們使用的波長(zhǎng)區(qū)域中(一般紫外可見(jiàn)儀器均在190nm-1100nm范圍里,)上述部件在不同的波長(zhǎng)下的響應(yīng)值(光源的發(fā)射強(qiáng)度、單色器的色散強(qiáng)度、檢測(cè)器的放大倍數(shù))均不相同;通俗地說(shuō)、即使沒(méi)有樣品,儀器如果不做基線(xiàn)校正,那么在190nm至1100nm的范圍中,吸光值或透過(guò)率不會(huì)是一條直線(xiàn),這是一種客觀(guān)的物理現(xiàn)象。


            (二)被校正的基線(xiàn)種類(lèi)和用途

            (1)系統(tǒng)基線(xiàn):

            所謂系統(tǒng)基線(xiàn)就是儀器固有的波長(zhǎng)范圍的總基線(xiàn);例如一臺(tái)儀器出廠(chǎng)設(shè)計(jì)的波長(zhǎng)全程范圍是190nm至1100nm,那么它的系統(tǒng)基線(xiàn)就是這個(gè)范圍。一般來(lái)講,作為分析人員對(duì)一臺(tái)儀器做全程掃描測(cè)試是比較少見(jiàn)的;之所以要做系統(tǒng)基線(xiàn)的目的一般是將儀器的光學(xué)系統(tǒng)的響應(yīng)值校正到基本一致;這就類(lèi)似馬拉松賽跑一樣,只要大家在同一起跑處(注意:不是起跑線(xiàn))比賽,前后差幾米出發(fā)無(wú)所謂。


            (2)用戶(hù)基線(xiàn):

            所謂用戶(hù)基線(xiàn)就是分析者自己設(shè)定的測(cè)量波長(zhǎng)區(qū)域的一段基線(xiàn);由于這是分析所需要的區(qū)域,為了保證測(cè)試的準(zhǔn)確性,故用戶(hù)基線(xiàn)的校正是非常重要和必要的;這就類(lèi)似百米賽跑一樣,運(yùn)動(dòng)員要在同一個(gè)起跑線(xiàn)上比賽而不能搶跑,否則無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算成績(jī)。


          • (三)基線(xiàn)校正的方法

            (1) 系統(tǒng)基線(xiàn):

            系統(tǒng)基線(xiàn)的校正較為簡(jiǎn)單,一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品,僅做光學(xué)系統(tǒng)的校正;如果一定要使用全波段的測(cè)量那另當(dāng)別論。同時(shí)需要注意的是:系統(tǒng)基線(xiàn)無(wú)需經(jīng) 常校正,一般半個(gè)月或一個(gè)月校正校正一次即可。對(duì)有的儀器來(lái)說(shuō),系統(tǒng)基線(xiàn)校正過(guò)于頻繁反而會(huì)造成基線(xiàn)漂移嚴(yán)重。


            (2) 用戶(hù)基線(xiàn)校正:

            正確的校正方法是:

            兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中,校正波長(zhǎng)范圍要大于分析波長(zhǎng)范圍;例如、分析設(shè)定范圍為220nm-500nm,那么校正波長(zhǎng)就要設(shè)定為210nm-510nm;等待校正結(jié)束后再將波長(zhǎng)設(shè)定回到原來(lái)的220nm-500nm范圍。


            這種校正方法的優(yōu)點(diǎn)是:

            如果校正波長(zhǎng)與分析波長(zhǎng)*吻合一致,有可能在校正后的基線(xiàn)兩端出現(xiàn)大的噪聲;如果校正范圍大于實(shí)際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。關(guān)于這種校正方法,許多使用者往往不知曉或忽略掉了。


            值得注意的是,有的儀器操作者在做基線(xiàn)校正時(shí),參比一側(cè)不放參比溶液,也就是用空氣來(lái)做參比對(duì)照。這種方法在可見(jiàn)區(qū)對(duì)有的樣品也許有時(shí)影響不大,但在紫外區(qū)影響就會(huì)很明顯了。嚴(yán)格的說(shuō),用空氣做參比所測(cè)得的結(jié)果不是真正意義上的校正光譜。


            (四)基線(xiàn)校正的注意事項(xiàng)

            (1) 基線(xiàn)校正時(shí)要保證儀器有一定的預(yù)熱時(shí)間;

            (2) 每更換一種參比溶液后均要重新做基線(xiàn)校正;

            (3) 如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時(shí)測(cè)試結(jié)果會(huì)出現(xiàn)負(fù)值,此時(shí)要考慮使用何種溶液做基線(xiàn)校正了。


          • 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)問(wèn)題處理:

            1、執(zhí)行了自動(dòng)調(diào)零后儀器處于什么狀態(tài)?

            自動(dòng)調(diào)零把當(dāng)前固定波長(zhǎng)的光度讀數(shù)調(diào)節(jié)為0或者1**%,取決于測(cè)定的方式。使用自動(dòng)調(diào)零減去了空白讀數(shù)。通常,在單個(gè)固定波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)使用自動(dòng)調(diào)零,如果是多波長(zhǎng)測(cè)定,應(yīng)該執(zhí)行基線(xiàn)校正。


            2、為什么執(zhí)行自動(dòng)調(diào)零后光譜仍然沒(méi)有得到有效的校正?

            因?yàn)樽詣?dòng)調(diào)零只校正一個(gè)點(diǎn);要校正光譜范圍,需要進(jìn)行基線(xiàn)校正或精細(xì)的基線(xiàn)校正。精細(xì)的基線(xiàn)校正應(yīng)該定期進(jìn)行,一般每月一次,在樣品室中不必放任何容器。


            3、基線(xiàn)校正后儀器的狀態(tài)如何?

            基線(xiàn)校使時(shí)儀器在制定得波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光譜讀數(shù)調(diào)整為零。


            4、為什么基線(xiàn)校正不能正常起作用?

            是否樣品室中放了樣品?基線(xiàn)校正時(shí)有三種選擇,可確保基線(xiàn)校正的正常。

            ①樣品室池架內(nèi)空置(空氣對(duì)空氣)。此時(shí)校正儀器的基線(xiàn),特別適合精細(xì)的基線(xiàn)校正。

            ②樣品池中放入溶劑,參比側(cè)空置。

            ③樣品和參比池中都放入溶劑。


            做基線(xiàn)校正時(shí)要考慮試劑的使用波長(zhǎng)范圍問(wèn)題,因?yàn)橛械脑噭┰谀硞€(gè)波長(zhǎng)以下的吸光度值會(huì)無(wú)限大,這時(shí)去做校正會(huì)超出儀器的有效量程范圍,無(wú)法得到真正的結(jié)果。關(guān)于試劑的使用波長(zhǎng)范圍,目前一般在試劑瓶的標(biāo)簽上會(huì)有標(biāo)注。


          TEL:13798128437

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